以鉛為例—淺談食品中重金屬元素檢測方法驗證

對樣品的測定，在選擇方法時，可以優先選擇標準方法、我國國家標準方法。對于非標準方法、超出預定范圍使用的標準方法，擴充和修改過的標準方法都需要對方法進行驗證，既進行方法性能檢驗，證明所選方法符合分析要求、切實可行，滿足客戶要求。

然而，怎么做方法驗證

1  方法驗證內容
       方法驗證內容主要有標準曲線、檢出限、定量限、精密度和準確度。

1.1  標準曲線
       采用儀器對方法進行檢驗時，首先要建立樣品和儀器之間的關系。通常采用標準曲線來表示，利用不少于5點（不包括原點）的實驗數據算出待測物和儀器響應值之間的線性回歸方程并計算相關系數（r）：以待測物的量（如ng）或濃度（如ng/mL）為橫坐標，響應值（吸光度或熒光強度）為縱坐標制作標準曲線，確定線性范圍，線性相關系數應該大于0.9990。實驗室要求原子吸收火焰法r>0.9990，石墨爐法r>0.9950，原子熒光光度法r>0.9990。

    在做方法驗證之前，我們首先得知道樣品中重金屬元素的限度（如水產及水產制品中鉛的限度為0.5mg/kg），根據樣品的性質及儀器的靈敏度等因素，然后確定線性范圍，線性范圍中Zui高點的標液濃度一般是重金屬元素的限度濃度的1~2倍，這是比較關鍵的一步。例子：稱0.5g水產及水產制品經微波消解、趕酸處理后，轉移定容到25mL容量瓶中，如果樣品中鉛的含量為鉛的*0.5mg/kg，那么樣品中的濃度為10ng/mL，設定標液曲線范圍的Zui高點濃度為20ug/mL，由于大部分樣品的含量都在鉛的*0.5mg/kg以下，所以按照稱樣量為0.5g，定容到25mL，線性范圍為0~25ng/mL是比較合適的。

       標準曲線配制步驟（以鉛標準曲線配制方法為例）：
（1）精密吸取單元素標準鉛溶液液（1.0mg/mL,國家標準物質中心，批號GBW08619）1.0mL，置100mL量瓶中，加硝酸（0.5mol/L）至刻度，混勻，得到10ug/mL鉛標準儲備液；

（2）再精密吸取上述標準儲備液0.5mL，置200mL量瓶中，加硝酸（0.5mol/L）至刻度，混勻，得到25ng/mL鉛標準使用液。用石墨爐自動進樣器自動稀釋成每1mL含2.5、5.0、10.0、15.0、25.0ng鉛并繪制標準曲線，或根據試樣中鉛含量稀釋成適當的濃度梯度供原子吸收分光光度計測定。

（3）將標準工作液導入原子吸收分光光度計，用超純水調零，在283.3nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線（儀器可以自動進行繪制標準曲線）。

1.1.1  標準曲線配置注意事項
（1）先要確定標準曲線的范圍，可以從重金屬的限值入手，GB 2762-2012食品安全國家標準 食品中污染物*，多種食品中鉛的限值如下：

   然后調整稱樣量，如果按照飲料中鉛Zui

大限值0.05mg/kg，稱取1g飲料樣品，處理后定容到10mL，那么樣品溶液濃度為5ng/mL，由于大部分飲料含重金屬的量都要比限值低，所以要靈活調整標準曲線的范圍，或者稱樣量的大小。

（2）要考慮儀器測量該金屬元素的靈敏度，如果測量該元素的靈敏度低，可以適當的增加稱樣量，減少定容體積，增大標準曲線溶液的濃度。相反，如果該元素的靈敏度高，要相對減少稱樣量，增大定容體積，必要的時候進行稀釋。
（3）如果樣品含量較高（需要經驗），在稱樣時和定容時應該考慮Zui好使樣品溶液的濃度落在標準曲線的1/3~2/3的濃度范圍，在這個范圍時，測量的準確性和精密度相對較高。

（4）配制標準曲線時，盡可能使用校正過的移液槍、移液管、容量瓶，標準溶液中間儲備液在配制好后放置一段時間（一般為10~20min），再稀釋成標準曲線系列工作溶液。
（5）在稀釋標準溶液，配制標準系列時，一般使用同一個移液槍或者刻度移液管進行稀釋，保證相同的偏差，有利于配制出相關系數較好的標準系列工作液。